化学试剂亚甲基蓝
Chemical reagent
Methylene blue
分子式：C16H18N3SCl·3H2O
相对分子质量：373.90
1 范围
本标准规定了化学试剂亚甲基蓝的性状，技术要求、试验方法，检验规则和包装及标志。
本标准适用于化学试剂亚甲基蓝的检验。
2 规范性引用文件
下列文件对本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。
凡不注日期引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本标准。
GB/T 603-2002 化学试剂 试验方法中所用制剂及制品的制备
GB/T 6682-2008 分析实验室用水规格和试验方法
GB/T 9721-2006 化学试剂 分子吸收分光光度法通则（紫外和可见光部分）
GB/T 9741-2008 化学试剂 灼烧残渣测定通用方法
GB 15346-2012 化学试剂 包装及标志
HG/T 3921-2006 化学试剂 采样及验收规则
3 性状
化学试剂亚甲基蓝为深绿色结晶或深褐色结晶性粉末，难溶于冷水及醇，加热后则易于溶解。
4 技术要求
化学试剂亚甲基蓝的技术要求见表1
指示剂 生物染色剂
含量,w/% ≥ 82.0 80.0（内控）
吸收特性 合格 —
质量吸收值(1%) 2200-2750 —
生物染色试验 — 合格
干燥失重,w/% ≤ 15.0 15.0
灼烧残渣(硫酸盐),w/% ≤ 0.5 0.5
乙醇溶解试验 合格 合格
变色试验 合格 —
5 试验方法
本试验方法中，除另有规定外，制剂及制品，均按GB/T 603-2002 的规定制备，实验用水应符合GB/T6682-2008 中三级水规格，样品均按精确至0.01g 称量 。本标准中所用溶液以“%”表示的均为质量分数。修约结果与指标值保持一致。
5.1 含量
5.1.1 仪器
分光光度计的波长、吸光度的准确性应符合GB/T 9721-2006 的规定
5.1.2 测定条件
波长：663nm-667nm；
吸收池厚度：1cm；
参比溶液：水。
5.1.3 测定方法
称取（5.4）项测定后的样品75mg，称准至0.0002g，移入500mL 容量瓶中，并用水稀释至刻度，摇匀。准确吸取2.0mL 样品溶液，置于100mL 容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，取该溶液按5.1.2规定的测定条件测定吸光度。
5.1.4 测定结果
亚甲基蓝的质量分数w，数值以“%”表示，按式(1)式计算：
A
w ＝ ────── ×100--------------（1）
0.787
式中：
A─样品溶液的吸光度；
0.787─标样溶液的吸光度。
5.2 吸收特性
5.2.1 仪器
分光光度计的波长、吸光度的准确性应符合GB/T 9721-2006 的规定。
5.2.2 测定条件
波长：λ max－15nm、λ max＋15nm(λ max＝664-666nm)
吸收池厚度：1cm；
参比溶液：水。
5.2.3 测定方法
将5.1.3 中测吸光度的样品溶液，分别测在λ max－15nm 及λ max ＋15nm 的吸光度。λ max－15nm处的吸光度与λ max＋15nm 处的吸光度之比应在1.21 到1.70 之间。
5.3 质量吸收值
5.3.1 仪器
分光光度计的波长、吸光度的准确性应符合GB/T 9721-2006 的规定。
5.3.2 测定条件
同5.1.2。
5.3.3 测定方法
同5.1.3。
5.3.4 测定结果
质量吸收值按式（2）计算：
A
X＝───── ----------------（2）
3×10-4
式中：
X ─ 质量吸收值；
A ─ 样品溶液的吸光度；
3×10-4 ─ 以1%为单位的样品浓度。
5.4 生物染色试验（任选下列任一项试验完成）
5.4.1 Plsohinger 氏缓冲亚甲基蓝法
取含尼氏小体的新鲜神经组织材料，固定于乙醇溶液(95%)中，石腊包埋。将[HAc]=1mol/L 溶液1.0mL；[NaAc]=1mol/L 溶液1.0mL；亚甲基蓝0.064g；蒸馏水100ml 混合。配制成染色溶液。
将[HAc]=1mol/L 溶液1.0mL，[NaAc]=1mol/L 溶液1mL，蒸馏水100mL 混合。配制成洗液。切片脱腊入染色液10min，染色后用洗液冲洗；以4%钼酸铵水溶液固定染色数分钟；蒸馏水冲洗，乙醇脱水，二甲苯透明，香胶封固；
镜检结果：尼氏小体呈蓝色。
5.4.2 Methylene blue—phloxine 对比染色取新鲜组织材料以Zenker 氏固定液固定，石腊包埋；切片脱腊入0.3%亚甲基蓝溶液2min—3min；洗尽切片上的染料，酸化数秒钟（适量3%盐酸浸润）；放入0.5%荧光桃红溶液1min—2min；冲洗切片上染料，乙醇脱水，二甲苯透明，封固；染色结果：细胞核应呈蓝色，细胞质应呈红色。
5.4.3 白喉杆菌及牛乳中的细菌进行染色检验
以白喉患者喉部做出培养并制成涂片。
用同一样品配成以下三种溶液：（1）Loeffler 氏液：亚甲基蓝0.3g，乙醇溶液(95%)30mL，0.01%KOH100mL。
(2)亚甲基蓝乙醇水溶液：方法同前但用蒸馏水代替0.01%KOH。
(3)1%亚甲基蓝溶液。
涂片依次入三种溶液染色数秒钟，然后水洗，吸干；染色结果：亚甲基蓝样品能使菌体中的颗粒染上蓝色。作Wright 氏染色剂进行染色时，对血像中的Ｗ.Ｂ.Ｃ形态染色清晰。
5.5 干燥失重
称取1g 样品，称准至0.0002g，置于已在105℃±2℃恒重的称量瓶中，于105℃±2℃干燥至恒重。干燥失重的质量分数w1，数值以“%”表示，按式（3）计算：
m1-m2
w1 = ───── × 100-------------（3）
m1
式中：
m1-恒重前样品的质量，g；
m2-恒重后样品的质量，g。
5.6 灼烧残渣
称取1g 样品，置于已在650℃±50℃恒重的瓷坩埚中，缓缓加热至样品炭化，冷却，再加1mL 硫酸湿润，继续加热至硫酸蒸汽逸尽，在650℃±50℃的高温炉中灼烧至恒重，灼烧残渣质量分数w 按GB/T9741-2008 的规定计算。
5.7 乙醇溶解试验
称取0.1g 样品，溶于100mL 乙醇溶液(95%)中，样品应全部溶解，无机械杂质。（保留溶液）
5.8 变色试验
5.8.1 试剂和溶液
取1mL 三氯化钛原液用9mL 盐酸溶液(10%)稀释。
5.8.2 测定方法
吸取5.7 项测定后溶液3-4 滴，加水稀释至10mL，滴加三氯化钛溶液数滴，溶液应从蓝色变为无
6 检验规则
按HG/T 3921-2006 的规定，进行采样及验收。
7 包装及标志
按GB 15346-2012 的规定进行包装，并给出标志，其中：
内包装形式：NBY-4、NBY-5；
外包装形式：WB-1、WB-2；
包装单位：第2、3 类
或按客户要求包装。